プールと部屋

試験室

落ち着いた予測できる部屋が、落ち着いた解釈しやすい動物をつくります。

動物は私たちよりも試験室のことによく気づきます。冷蔵庫のうなり、前の動物のにおい、実験者の立ち位置の変化。ここでは部屋そのものと、部屋を毎日同じに保つ小さな習慣についての質問を扱います。

よくある質問

試験室はどう整えるべきですか?

試験専用の静かな部屋を使い、迷路を中央に置き、壁には固定した手がかりを十分に置きます。1)トラッキング用PCと実験者は、カーテンやついたての後ろにして、動物から見えないようにします。2)研究の間はすべてを同じ場所に置きます。3)室温を一定に保ちます(通常20-24 °C)。 地域の倫理委員会、ライセンスの条件、獣医師の判断が常に優先されます。

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動物は部屋の周りの手がかりで移動するので、試行の間に動くもの(人、かばん、ワゴン)はどれも誤った手がかりになりえます。実験者は幕やついたてで隠し[Bromley-Brits 2011]、PCはプールから見えない場所に置きます[HVS]。レール付きの天井カーテンがあれば、手がかり試行のときに部屋を隠せます[Vorhees & Williams 2024]。大きなプールを注文する前に搬入経路を確認します[HVS]。

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Morrisは、プールをカーテンで囲むと成績がチャンスレベルまで下がることを示し、遠位の部屋の手がかりが場所学習を支えていることを確かめました[Morris 1984]。設置はARRIVEの項目9として報告します[Percie du Sert 2020]。

出典: Bromley-Brits et al. (2011). Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer's Disease Model Mice. Journal of Visualized Experiments (53). doi:10.3791/2920; doi:10.1016/j.crtox.2024.100151; gov.uk/government/publications/care-and-accommodation-of-animals-in-science-advisory-standards; Morris (1984). Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat. Journal of Neuroscience Methods 11(1):47-60. doi:10.1016/0165-0270(84)90007-4; doi:10.1371/journal.pbio.3000410

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水迷路のために部屋、プール、プラットフォームをどう準備すればよいですか?

カメラはプールの中心の上、プールは画像をほぼ埋め、遠位の手がかりは遠くに、照明は拡散光で。1)プールの直径は約1.8-2 m、水深約30 cmの上に壁30 cm。2)プラットフォームは水面のすぐ下、上面は水面の面積の1/50から1/100。3)水中から見えないほど低くしたアッパーライト4台。4)トラッキング用PCはプールから見えない場所に。

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部屋は正方形か、ついたてで囲まれているのが理想で、部屋が大きいほど遠位の手がかりに有利です。プールの台はロック付きキャスターで、作業しやすい高さにします(満水のプールは1.5 tを超えることがあり、動くとキャリブレーションが変わります)。プールは真円で、内側が均一であること(コントラストのため黒か白)。被験体はプールの壁に向けてそっと入れ、入った瞬間に試行を開始します。HVSは体温より約13 °C低い水を勧めています。マウスでは小さめのプールで10 cmのプラットフォームがよく使われます。大きなプールではより大きなプラットフォーム(例:約20 cm)を使います。小さなプールは浅めでもかまいません。大きなプールは搬入経路を確認してください。

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プールの大きさ、プラットフォームの大きさ、水温は種とプロトコルによって違うので、迷ったらHVSにお尋ねください。天井が低い場合は、1 mを超えるカメラマウントや広角レンズが向いています。

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試験室では、どんな騒音に気をつけるべきですか?

部屋を静かに保ち、突然の音を避けます。げっ歯類は私たちには聞こえない超音波を聞くので、水の漏れる蛇口を直し、きしむワゴンは試行中に入れず、モニターは装置から離します。人の出入りは最小限にします。 地域の倫理委員会、ライセンスの条件、獣医師の判断が常に優先されます。

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英国の指針は、水の漏れる蛇口、ワゴンの車輪、コンピューターのモニターを超音波(20 kHz超)の発生源として挙げ、突然の不規則な音に注意を促しています[Home Office]。環境の管理がよくなればばらつきが減り、必要な動物の数を減らせることがあります[Home Office]。

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超音波検出器は隠れた発生源を見つけるのに役立ちます。部屋の片側の音は方向の手がかりにもなりうるので、音源は部屋のどの側でも、毎日同じに保ちます。

出典: gov.uk/government/publications/care-and-accommodation-of-animals-in-science-advisory-standards

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試行の前に、動物を試験室でどれくらい落ち着かせるべきですか?

動物はホームケージごと試験室に運び込み、始める前に落ち着かせてください。公表されたプロトコルでは少なくとも30分です。施設到着後の馴化期間は、獣医師か適任者が決めます。 地域の倫理委員会、ライセンスの条件、獣医師の判断が常に優先されます。

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水迷路とオープンフィールドのプロトコルでは、部屋への順応に少なくとも30分をとります[Bromley-Brits 2011; Seibenhener & Wooten 2015]。輸送後の馴化は、国の規則か有資格者が決めます[Home Office]。ARRIVEは馴化の報告を求めています[Percie du Sert 2020]。

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落ち着かせる時間はすべての動物、すべての日で同じにし、記録します。1日のうち最適な時間帯の根拠は見つかりませんでした。一定に保ち、報告してください。

出典: Bromley-Brits et al. (2011). Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer's Disease Model Mice. Journal of Visualized Experiments (53). doi:10.3791/2920; Seibenhener & Wooten (2015). Use of the Open Field Maze to Measure Locomotor and Anxiety-like Behavior in Mice. Journal of Visualized Experiments (96). doi:10.3791/52434; gov.uk/government/publications/care-and-accommodation-of-animals-in-science-advisory-standards; doi:10.1371/journal.pbio.3000410

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動物の合間に、迷路やアリーナを何で清掃すべきですか?

動物の合間には、尿、糞、においの跡を取り除くように清掃し、次の動物の前に面を完全に乾かします。エタノールが一般的ですが、においが残りにくいので次亜塩素酸水を使う研究室もあります。研究の間は同じ洗浄剤を使います。 地域の倫理委員会、ライセンスの条件、獣医師の判断が常に優先されます。

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プロトコルはさまざまです。オープンフィールドには95%エタノール[Seibenhener & Wooten 2015]、バーンズのテーブルには10-75%エタノール[Gawel 2019]、または次亜塩素酸水[Komada 2008]。エタノールの蒸気は行動に影響しうるので、換気して蒸発させます[Gawel 2019]。水迷路では糞を取り除き、定期的に水を替えます[Vorhees & Williams 2024]。

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やり方はまちまちで、すべての試験に最適な洗浄剤はありません。バーンズのテーブルは拭くだけでなく回転させると、においの跡が手がかりとして使われなくなります[Gawel 2019]。可燃性の溶剤は安全担当チームに確認してください。

出典: Seibenhener & Wooten (2015). Use of the Open Field Maze to Measure Locomotor and Anxiety-like Behavior in Mice. Journal of Visualized Experiments (96). doi:10.3791/52434; Gawel et al. (2019). Assessment of spatial learning and memory in the Barnes maze task in rodents, methodological consideration. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology 392(1):1-18. doi:10.1007/s00210-018-1589-y; doi:10.3791/1088; doi:10.1016/j.crtox.2024.100151

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どの実験室の条件を記録し、報告すべきですか?

行動に影響しうるすべての条件を記録し、報告します。室温と水温、照度(lux)と光源の種類、時間帯、誰が動物を扱ったか、そして変わった出来事。これらは方法の項に書きます。 地域の倫理委員会、ライセンスの条件、獣医師の判断が常に優先されます。

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ARRIVE 2.0は、手順をいつ、どこで、どれくらいの頻度で行ったか、馴化、無作為化、盲検化、人道的エンドポイントを求めています[Percie du Sert 2020]。水温は毎日記録します[Vorhees & Williams 2024]。luxは人の視覚で重み付けされているので、luxに加えて光源の種類も報告します[Peirson 2018]。

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無作為化が報告されているのは論文の約30-40%、盲検化は約20%にすぎないので[Percie du Sert 2020]、これらをはっきり報告すると研究が強くなります。

出典: doi:10.1371/journal.pbio.3000410; doi:10.1016/j.crtox.2024.100151; doi:10.1016/j.jneumeth.2017.04.007

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動物やトラッキングを妨げずに、スタッフが作業できるだけの視界を確保するには?

ついたての奥のPCには、かさ付きのデスクライトを迷路と反対側に向けて使い、明るさの急な変化を避けます。 地域の倫理委員会、ライセンスの条件、獣医師の判断が常に優先されます。

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プールを照らさず、カメラの画像にも映らないように、暗めの間接的な作業用照明を置きます。照明は十分で、まぶしさがなく、照度の大きな差を避けるべきです[HSE HSG38; HSE lighting]。調光できるランプなら、必要最小限の明るさにできます。

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おすすめのやり方:ランプがカメラの画像に映っていないか確認します。

出典: hse.gov.uk/pubns/books/hsg38.htm; hse.gov.uk/humanfactors/topics/lighting.htm

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設置全体を1か所で見るには、モリス水迷路(MWM)の装置をご覧ください。

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